Publicerad 14 juli 2026 kl 19:48
Fluorescens-mikroskopi bygger på Stokes-skiftet (som förklaras i tidigare artikel om Dino-Lite AM4515T4-GFBW för GFP): en fluorofor-molekyl absorberar ljus vid en kortare våglängd (exkitation) och emitterar ljus vid en längre våglängd (emission). Genom att BLOCKERA exkitations-ljuset med ett filter framför sensorn ser vi bara emissions-ljuset — dvs. själva fluoroforerna som lyser.
Olika fluoroforer har olika exkitations- och emissions-våglängder. De tre huvudkategorierna:
Kategori 1: UV-exciterade fluoroforer (350-400 nm)
- DAPI (4′,6-diamidino-2-fenylindole): Binder till DNA. Cellkärn-färgning i histologi. Exkitation 358 nm, emission 461 nm (blå).
- Hoechst 33342/33258: Alternativa DNA-färgningar med liknande spektrum.
- Serotonin, tryptofan: Autofluorescerande aminosyror.
Kategori 2: Blå-exciterade fluoroforer (450-490 nm)
- GFP (Green Fluorescent Protein): Från maneten Aequorea victoria. Reporter-gen för molekylärbiologi. Exkitation 488 nm, emission 507 nm (grönt).
- FITC (Fluoresceinisothiocyanat): Antikroppar-konjugering för immunfärgning. Exkitation 495 nm, emission 519 nm.
- Ethidium bromide: DNA-bindande markör (interkalerar). Exkitation 302/518 nm, emission 605 nm.
Kategori 3: Djupt-röd och NIR-exciterade fluoroforer (600-950 nm)
Detta är AM4517MT-DFRW’s specialiserade domain:
- Indocyanin-grönt (ICG): FDA-godkänd klinisk kontrast-vätska sedan 1959. Exkitation ~805 nm (nära-IR), emission ~830 nm. Används i:
- Lever-kirurgi (leverfunktion-bedömning, tumör-kartläggning).
- Kardiologi (hjärtutflödes-mätning).
- Oftalmologi (retinal angiografi).
- Onkologisk kirurgi (sentinel-lymfnod-lokalisering).
- Cy5, Cy5.5, Cy7 (Cyanine dyes): Fluorescerande färger med excitation 649 nm (Cy5), 675 nm (Cy5.5), 743 nm (Cy7). Emission 670, 695, 767 nm respektive. Används i:
- Multiplex-immunfärgning (kombineras med FITC och Alexa-färger för multi-marker-detection).
- DNA/RNA-microarray-analys.
- Antikropps-labeling.
- Quantum dots: Halvledar-nanokristaller med storleks-avstämbar emissions-våglängd. Djupt-röda varianter (CdSe/ZnS 620-720 nm) för långsiktig cell-tracking i cancer-forskning.
- Alexa Fluor 594, 633, 647: Molekulära färgare med hög stabilitet. Exkitation 594, 632, 650 nm. Ersättning för klassiska Cy-färger med bättre fotostabilitet.
- Ethidium bromide och SYBR-färger: Nucleinsyra-band-detektering på gel-elektroforetiskt separerade prov.
620 nm exkitation — varför just den våglängden?
AM4517MT-DFRW har 7 st 620 nm-LEDs (djupt rött) plus 1 vit LED (för lokalisering och fokusering före fluorescens-avbildning).
620 nm är valt för att excitera bredspektrums-fluoroforer i det djupt-röda intervallet:
- Cy5 (649 nm exk): 620 nm-LED excitatarr suboptimalt men effektivt.
- Alexa 594 (594 nm exk): 620 nm-LED är tillräckligt nära för god exkitation.
- Ethidium bromide (518 och 302 nm exk): 620 nm excitatarr sekundär-topp.
- Quantum dots (bredspektrum 400-620 nm exk): 620 nm ger god emission-produktion.
Val av 620 nm istället för mer specifika våglängder (som 649 för Cy5) är kompromiss:
- Bredare spektral täckning av flera fluoroforer.
- Lägre LED-kostnad än specifika röda LEDs.
- Mindre risk för fotoblekning av känsliga prov.
655-950 nm emissions-filter — täcker hela NIR-fönstret
Bandpass-filter framför sensorn låter bara igenom ljus i 655-950 nm-området. Detta blockerar:
- 620 nm-exkitations-LED-läckage (ingen exkitations-signal i emissions-bilden).
- Alla kortare våglängder (blockerar autofluorescens från cellulära komponenter).
- Room-belysning under 655 nm (dagsljus, standard-LED).
Räckvidden 655-950 nm täcker:
- Cy5/Cy5.5/Cy7 emissions-toppar (670, 695, 767 nm).
- Indocyanin-grönt (ICG) emission (830 nm).
- Quantum dot NIR-varianter (700-900 nm).
- Alexa 647/700/750 emissions.
Varför NIR-fluorescens är kritisk för klinisk kirurgi
Klinisk kirurgi använder ICG-fluorescens sedan 2000-talet för visualisering av vävnad-strukturer under operation:
1. Deep tissue penetration: NIR-ljus (700-900 nm) tränger 2-5 gånger djupare in i vävnad än synligt ljus (400-700 nm). Detta beror på att både hemoglobin-absorption och vatten-absorption är LÄGRE i NIR-området (kallas ”biologisk fönster”).
2. Låg autofluorescens från vävnad: Biologisk vävnad har naturlig autofluorescens i det gröna området (400-500 nm) men mycket lite i NIR. Detta ger renare bild-signal utan bakgrunds-brus.
3. Real-time imaging under operation: Kirurgen ser fluorescerande strukturer överlagrade på synligt ljus-bild. Ideal för:
- Sentinel-lymfnod-identifikation vid brostcancer- och melanom-operation.
- Perfusions-bedömning i plastikkirurgi och rekonstruktiv kirurgi.
- Gall-vägar-visualisering under laparoskopisk kolecystektomi.
- Tumör-marginal-bedömning under bröst- och tarm-cancer-operation.
Vetenskaplig forskningsanvändning
Onkologi: Cancer-cells-tracking med quantum dot-markering. Djupt-röd emission tillåter live-cell-imaging utan foto-toxicitet från UV.
Neurovetenskap: Ca²⁺-sensitiva färger (Fluo-4, GCaMP) för neuron-aktivitet-övervakning.
Immunologi: Multi-color flow cytometry där NIR-varianter komplementerar FITC/PE för samtidig detektion av flera markörer.
Molekylärbiologi — gel-elektroforetiska: Ethidium bromide-färgade DNA/RNA-band på agaros-geler. Traditionellt UV-belysning används, men NIR-alternativ är säkrare för operatör.
Läkemedelsforskning: Cell-viabilitets-assays med propidium jodide (PI) och etidium homodimer-1 för döda-celler-detektion.
Växelbart vitt ljus — praktiskt viktigt
En vit LED är inbyggd som komplement till de 7 röda LEDs. Praktisk användning:
- Slå på vitt ljus (standard-mikroskopi-mode).
- Lokalisera intressant område i provet (t.ex. specifik cell, ett band på gelen).
- Ställ in fokus och zoom.
- Växla till röd-ljus-mode (aktivera 7 st 620 nm-LEDs).
- Emissions-filter automatiskt aktiverat.
- Registrera fluorescens-bild.
Utan vit-ljus-mode skulle operatör behöva blindnavigera i mörk fluorescens-bild — mycket svårare för prov-lokalisering.
Automatisk förstoringsavläsning (AMR)
Standard Dino-Lite-funktion: instrumentet läser AV magnificationen automatiskt via den inbyggda enkoder-mekanismen i zoomringen. Bilden dokumenterar sin egen förstorings-värde i metadata.
Kritiskt för fluorescens-forskning där kvantitativa mätningar av objekt-storlekar är viktiga (t.ex. tumör-storlek, celln-storlek, DNA-band-bredd).
Robust metallhölje
Standard Dino-Lite har plast-hölje. AM4517MT-DFRW-serien har anodiserat aluminium-hölje. Fördelar:
- Bättre dimensionsstabilitet (viktigt när instrumentet monteras på precisionsstativ).
- EMI-skärmning (viktigt för användning nära känslig elektronisk lab-utrustning).
- Bättre värmesink (7 st LEDs generar varme; aluminium avleder bättre än plast).
- Längre livslängd vid intensiv daglig användning.
Klinisk vs forsknings-användning
Klinisk kirurgi: Standard är dedikerade kirurgiska NIR-fluorescens-system (KARL STORZ IMAGE1 S, Stryker SPY-PHI) som kostar 500 000-2 000 000 kr. AM4517MT-DFRW är INTE en klinisk-godkänd enhet — den kan användas för forsknings-tillämpningar och prekklinisk imaging, men INTE för direkt patient-vård.
Forsknings-lab: Konfokal fluorescens-mikroskop med NIR-kapabilitet kostar 500 000-3 000 000 kr. AM4517MT-DFRW ger 90 %-lösning för 15 000 kr — passar labor som gör screening-arbete eller lär-utveckling utan att behöva top-end-instrument.
Utbildning: Medicinska och biologiska universitet använder som demonstrations-verktyg för NIR-fluorescens-koncept i utbildning.
Kompatibilitet med Dino-Lite programvara
Instrumentet fungerar med standard DinoCapture-programvara (gratis) och Dino-Lite-integrerade lab-programvaror. Fluorescens-bilder lagras som JPEG/PNG med magnificationen och timestamp i EXIF-metadata.
Specifikationer
- Modell: Dino-Lite AM4517MT-DFRW EDGE PLUS.
- Sensor: 1,3 Mpixels CMOS, 30 fps upp till 1280×960.
- Belysning: 7 st 620 nm exkitations-LEDs + 1 vit LED (switchbar).
- Emissions-filter: 655-950 nm bandpass.
- Automatisk förstoringsavläsning (AMR).
- Anslutning: USB.
- Programvara: DinoCapture (ingår).
- Hölje: anodiserat aluminium (EMI-skärmning, robust).
Vad du får för pengarna
Dino-Lite AM4517MT-DFRW EDGE PLUS djupt-röd / NIR-fluorescens-mikroskop, 1,3 Mpixels-sensor, 7 st 620 nm exkitations-LEDs + 1 vit LED (växelbar), 655-950 nm emissions-filter (bandpass), automatisk förstoringsavläsning (AMR), anodiserat aluminium-hölje för EMI-skärmning och robusthet, DinoCapture-programvara ingår, USB-anslutning till dator. 14 289 kr.
Standard-verktyget för forsknings-laboratorier som arbetar med djupt-röd / NIR-fluorescens (Cy5, Alexa 594/647, quantum dots, ICG-forskning) — cancer-forskning, immunologi, molekylärbiologi, cell-tracking, gel-elektroforetiska prov. Merprisen över standard Dino-Lite motiveras för alla verksamheter som specifikt behöver NIR-emissions-detektering utan att investera i konfokal-mikroskop.
